萤火虫荧光素酶底物按需分装以避免反复冻融,-80 ℃ 避光保存,海肾荧光素酶底物现配现用。双荧光素酶实验实验前各个组分(细胞裂解产物,底物工作液等)都需要恢复到室温,实验操作过程中注意避光,整个过程尽量在 30 min 内完成,每个样品需充分混匀,并且混匀次数和时间尽量保持一致。如果细胞裂解产物需要暂存,常温不超过 6 小时,-20 ℃ 一个月,-80 ℃ 半年。首先排除转染效率问题,12 孔板多铺一孔细胞转染荧光质粒,观察转染的荧光效率,并设立阳性和阴性对照。排除转染问题后,如果荧光读值仍然较低,可以尝试增加转染质粒量。